Spectrophotométrie et étalonnage
Relier l’absorbance à la concentration par étalonnage, avec rigueur et prudence.
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Principe
Absorbance et spectre
La spectrophotométrie mesure l’absorbance d’une solution selon la longueur d’onde.
Aest une grandeur sans unité.- Le spectre repère l’absorbance selon
ext{la longueur d'onde}. - Le maximum d’absorption donne la meilleure sensibilité.
Repérage utile
- Choisir la longueur d’onde du pic d’absorption.
- Comparer des espèces par leur spectre.
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Relation de dosage
Beer-Lambert
L’absorbance A dépend du coefficient \varepsilon, de la longueur de cuve l et de la concentration c.
Conditions d’application
Conditions requises
- Solution homogène et diluée.
- Longueur d’onde fixée.
- Cuve de longueur connue.
Risques si non respectées
- Linéarité perdue.
- Résultat faux.
- Dosage non fiable.
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Étalonnage
Gamme étalon
- 1
Préparer des solutions de concentrations connues.
- 2
Mesurer leurs absorbances dans les mêmes conditions.
Exploitation
Une solution inconnue est mesurée sur la courbe d’étalonnage dans le domaine linéaire.
- On place son absorbance sur l’axe vertical.
- On lit la concentration correspondante par interpolation.
- On évite l’extrapolation hors de la gamme étalon.
La concentration inconnue est déterminée par lecture ou calcul sur la droite d’étalonnage.
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Fiabilité
Incertitudes et validité
| Point à vérifier | Pourquoi |
|---|---|
| Blanc correct | Corrige le signal de fond. |
| Répétition des mesures | Améliore la fiabilité. |
| Même cuve et même réglage | Réduit les écarts expérimentaux. |
À retenir
Même longueur d’onde, même cuve, même protocole : sinon la comparaison perd son sens.
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Mémorisation active
Questions flash
- Pourquoi choisit-on le maximum d’absorption ?
- Que représente la droite d’étalonnage ?
- Quand la loi de Beer-Lambert est-elle valide ?
Vocabulaire
- Absorbance
- Grandeur mesurée par le spectrophotomètre, notée
A. - Spectre
- Variation de l’absorbance selon la longueur d’onde.
- Gamme étalon
- Ensemble de solutions de concentrations connues.
Bilan
Résumé
- Le spectre aide à choisir la bonne longueur d’onde.
- La loi de Beer-Lambert relie
Aàc. - La gamme étalon sert à doser une solution inconnue.
- Le résultat reste valable dans le domaine de validité.